赛智科技积极研究工业明胶检测方案
赛智科技积极研究工业明胶检测方案 2012年05月25日 来源: 最近, 一则关于“果冻,老酸奶是由破皮鞋做成的”消息在网上疯传,因破皮鞋可以提炼出明胶。经调查发现,不仅老酸奶,多种果粒酸奶、谷物酸奶,甚至普通酸牛奶中,几乎都含有中含有明胶、琼脂、卡拉胶、果胶等食品增稠剂。明胶的品质主要取决于原料。通常来说,合格的明胶是从动物鲜皮、骨料内提胶,经6道提胶工序后,对提取的明胶进行蒸发、干燥,最后根据多项控制指标进行混合形成成品。但为了降低成本,获得更多利润,国内很多厂家用皮革厂经过鞣铬加工后的蓝矾皮的皮革屑,边角料、烂皮革等作为生产原料。皮革制成的明胶透明,无味,消费者根本无法将正规的食用明胶和皮革制成的明胶区分开来。
皮革水解蛋白是皮革废料或动物皮毛、脏器等水解生成的一种蛋白粉,对于乳与乳制品中皮革水解蛋白的鉴定,主要是通过对L-羟脯氨酸含量的测定。L-羟脯氨酸是胶原蛋白(皮革水解蛋白)特有的氨基酸,在乳酷蛋白中则没有,所以一旦检出,则可认为可能含有皮革水解蛋白,即可判断该乳制品中有可能含有由废弃皮革而来的成分。
赛智科技应用质检部采用L-羟脯氨酸衍生方法,利用公司自己的LC-10Tvp高效液相色谱仪,对L-羟脯氨酸进行了分析检测试验,并通过公司的VI2010色谱工作站进行了详细分析,得出的检测结果准确,可靠,供广大客户参考使用。 以下是L-羟脯氨酸的测定的详细检测方法: L-羟脯氨酸的HPLC测定 1 仪器与试剂 1.1 仪器、器皿 1.1.1 LC-10Tvp高效液相色谱仪 1.1.2 Vertex 色谱柱 250mm×4.6mm×5μm 1.1.3 11 mL水解瓶 1.1.4 1.5 mL塑料离心管 1.1.5 20 mL玻璃具塞刻度试管 1.1.6 5 mL玻璃具塞刻度试管 1.1.7 0.22 μm针头式过滤器 1.1.8 2 mL样品瓶 1.2 试剂 1.2.1 甲醇(色谱纯) 1.2.2 乙腈(色谱纯) 1.2.3 正己烷(色谱纯) 1.2.3 三乙胺(色谱纯) 1.2.4 冰醋酸(色谱纯) 1.2.5 磷酸氢二钠(无水色谱纯) 1.2.6 磷酸二氢钠(无水色谱纯) 1.2.7 L-羟脯氨酸标准品 1.2.8 蛋白水解试剂:称取0.1 g苯酚置于100 mL容量瓶,加入50 mL浓盐酸(36%-38%,摩尔浓度约为12 mol/L),然后加水定容至100 mL。 1.2.9 0.1 mol/L HCl水溶液:量取8.3 mL浓盐酸,然后用纯水定容至1000 mL。 1.2.10 衍生剂PITC溶液:将250 μL异硫氰酸苯酯(PITC)用乙腈定容至10 mL。 1.2.11 三乙胺溶液:将1.4 mL三乙胺用乙腈定容至10 mL。 1.2.12 衍生剂DNFB溶液:0.5 mL 2,4-二硝基氟苯(DNFB)溶于50 mL乙腈。 1.2.13 Na2B4O7缓冲溶液:称取1.91 g Na2B4O7•10H2O,用50 mL纯水溶解。 1.2.14 氨基酸储备液:称取一定量L-羟脯氨酸,用0.1 mol/L HCl水溶液溶解,得到浓度为 0.05 mol/L的储备溶液。 1.2.15 氨基酸使用液:将储备液用0.1 mol/L HCl水溶液稀释,得到浓度为0.0003 mol/L的L-羟脯氨酸溶液。 1.2.16 磷酸盐缓冲溶液:0.02 mol/L Na2HPO4 和NaH2PO4水溶液。 2 实验方法 2.1 样品水解 (1) 称取奶粉0.1 g或牛奶0.68 g置于蛋白水解瓶中(1.1.3),加入蛋白水解试剂(1.2.8),旋紧盖子,振荡混匀,110 °C下反应24 h。 (2) 反应完毕,将反应液全部转移至100 mL蒸馏瓶中,75℃下减压蒸馏至近干。 (3) 用12 mL0.1 mol/L HCl水溶液(1.2.9)分三次溶解残渣,并转移到20 mL玻璃具塞刻度试管(1.1.5),再用纯水定容至20 mL,待衍生。 2.2 样品衍生 2.2.1 异硫氰酸苯酯(PITC)衍生方法 (1)样品水解溶液衍生 量取200 μL样品水解溶液,置于1.5 mL塑料离心管中,加入100 μL三乙胺溶液(1.2.11)和100 μL衍生剂PITC溶液(1.2.10),混匀,室温反应1h,加入400μL正己烷(1.2.3),旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s,静置分层,取200 μL下层溶液与800 μL水混合,经0.22 μm针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。 (2) 标准溶液衍生化 量取200 μL L-羟脯氨酸使用液*(1.2.15),置于1.5 mL塑料离心管中,加入100 μL三乙胺溶液(1.2.11)和100 μL衍生剂PITC溶液(1.2.10),混匀,室温反应1h,加入正己烷400 μL(1.2.3),旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s,静置分层,取200 μL下层溶液与800 μL水混合,经0.22 μm针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。 *根据实际情况,氨基酸使用液浓度可进行调整,本方法中氨基酸使用液浓度仅供参考。 2.2.2 2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生方法 (1) 样品溶液衍生 取0.5 mL样品水解溶液置于5 mL玻璃具塞刻度试管(1.1.6)中,加入0.5 mL Na2B4O7缓冲溶液(1.2.13)和0.5 mL衍生剂DNFB溶液(1.2.12),具塞摇匀,于60 °C下避光反应1 h。反应完毕将试管置于冷水中冷却,用磷酸盐缓冲溶液(1.2.16)定容至5 mL,混匀后经0.22 μm针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。 (2) 标准溶液衍生取0.5 mL L-羟脯氨酸使用液(1.2.15)置于5 mL玻璃具塞刻度试管(1.1.6)中,加入0.5 mL Na2B4O7缓冲溶液(1.2.13)和0.5 mL衍生剂DNFB溶液(1.2.12),具塞摇匀,于60 °C下避光反应1 h。反应完毕将试管置于冷水中冷却,用磷酸盐缓冲溶液(1.2.16)定容至5 mL,混匀后经0.22 μm针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。 2.3 色谱条件 2.3.1 异硫氰酸苯酯(PITC)衍生色谱条件 色谱柱: Vertex 色谱柱250mm×4.6mm×5μm 流动相A: 0.05mol/L乙酸钠水溶液(冰乙酸调节PH值为6.50±0.05) 流动相B: 甲醇:乙腈:水=20:60:20(V:V:V) 流速: 1.0 mL/min 检测波长: UV 254 nm 柱温: 45℃ 进样体积: 10μL 梯度程序:
时间/min 0 39 40 45 46 60 流动相A/% 95 52 0 0 95 95 流动相B/% 5 48 100 100 5 5 2.3.2 2,4二硝基氟苯(DNFB)衍生色谱条件 色谱柱: Vertex 色谱柱 流动相A: 0.02mol/L Na2HPO4+ 0.02mol/L NaH2PO4水溶液 流动相B: 甲醇:乙腈=10:90(V:V) 流速: 1.0 mL/min 检测波长: UV 360 nm 柱温: 35℃ 进样体积: 10μL 梯度程序:
时间/min 0 35 42 50 60 流动相A/% 86 60 30 86 86 流动相B/% 14 40 70 14 14 3 色谱图
- 最好屏蔽泵的检修方法0动力卡盘检测仪器平衡机微型轴承阻燃材料Trp
- 最好上半年全国固定资产投资累计同比涨两成缠绕膜机高压油泵矿泉水韶山眼镜盒Trp
- 最好6月13日马鞍山H型钢最新价格行情滴丸机焊锡麻花钻塑料环招远Trp
- 最好苹果营销之道折磨顾客Pvc面板二手仪器胶州气缸盖无塔供水器Trp
- 最好硝酸异辛酯生产厂家齿轮加工功放板雷州石首液压油缸Trp
- 最好宝鸡屋面保温岩棉板销售高铁吸音岩棉板最新标准电缆服装机械卷扬机热风枪新沂Trp
- 最好分体式电磁流量计的测量优势炒冰机耕作机拉链机械深州药品包装机TRp
- 最好健身房电子票务系统微信支付宝自动扫码凹透镜防腐热电阻介休钳型表吸塑包装TRp
- 最火15日北京废不锈钢市场行情电视分配器机螺钉宁波桐乡种植机TRp
- 最好16日吉林市场报废汽车拆解废料价格行情磁力泵光收发器林州数控弯管机油过滤器TRp
- 最火木门产品上残留的甲醛如何祛除弹性档圈滚子链螺纹阀水洗机云浮Rra
- 最火多地经济收获稳中向好难点集中工业领域柴油高压风机扣管机扇叶烟尘净化器Rra